bệnh giun chỉ

Thiết bị xét nghiệm nhanh IgG/IgM bệnh giun chỉ

Chèn gói

Mẫu vật: Máu toàn phần/Huyết thanh/Huyết tương

Ngày có hiệu lực: 2015‐02

Chỉ dành cho sử dụng chẩn đoán trong ống nghiệm chuyên nghiệp.

MỤC ĐÍCH SỬ DỤNG

Xét nghiệm nhanh IgG/IgM bệnh giun chỉ là một xét nghiệm miễn dịch dòng chảy bên để phát hiện và phân biệt đồng thời ký sinh trùng giun chỉ kháng bạch huyết IgG và IgM (W. Bancrofti và B. Malayi) trong huyết thanh, huyết tương hoặc máu toàn phần của người.Xét nghiệm này nhằm mục đích sử dụng như một xét nghiệm sàng lọc và hỗ trợ trong

các  chẩn đoán nhiễm ký sinh trùng giun chỉ bạch huyết.Bất kỳ mẫu vật phản ứng nào với Xét nghiệm nhanh IgG/IgM của bệnh giun chỉ phải được xác nhận bằng (các) phương pháp xét nghiệm thay thế.

Bệnh giun chỉ bạch huyết được gọi là bệnh phù voi, chủ yếu do W. bancrofti và B. malayi gây ra, ảnh hưởng đến khoảng 120 triệu người trên 80 quốc gia1,2.Căn bệnh này được truyền sang người qua vết cắn của muỗi bị nhiễm bệnh, trong đó vi khuẩn hút từ người bị nhiễm bệnh sẽ phát triển

thành ấu trùng giai đoạn ba.Nói chung, việc tiếp xúc nhiều lần và kéo dài với ấu trùng bị nhiễm bệnh là cần thiết để hình thành sự lây nhiễm ở người.

Chẩn đoán ký sinh trùng xác định là sự chứng minh của microflariae trong các mẫu máu3.Tuy nhiên, xét nghiệm tiêu chuẩn vàng này bị hạn chế bởi yêu cầu lấy máu về đêm và

thiếu  có độ nhạy phù hợp.Phát hiện các kháng nguyên lưu hành có sẵn trên thị trường.Tính hữu dụng của nó bị giới hạn đối với W. bancrofti4.Ngoài ra, bệnh ấu trùng ấu trùng và kháng nguyên trong máu phát triển từ nhiều tháng đến nhiều năm sau khi tiếp xúc.

Phát hiện kháng thể cung cấp một phương tiện sớm để phát hiện nhiễm ký sinh trùng giun chỉ.Sự hiện diện của IgM đối với các kháng nguyên ký sinh trùng gợi ý tình trạng nhiễm trùng hiện tại, trong khi đó, IgG tương ứng với giai đoạn nhiễm trùng muộn hoặc nhiễm trùng trong quá khứ5.Hơn nữa, việc xác định các kháng nguyên được bảo tồn cho phép áp dụng thử nghiệm 'pan-filaria'.Việc sử dụng các protein tái tổ hợp giúp loại bỏ phản ứng chéo với các cá thể có

các bệnh ký sinh trùng khác6.Xét nghiệm nhanh IgG/IgM bệnh giun chỉ sử dụng các kháng nguyên tái tổ hợp được bảo tồn để phát hiện đồng thời IgG  và IgM đối với ký sinh trùng W. bancrofti và B. malayi mà không hạn chế việc lấy mẫu bệnh phẩm.

Xét nghiệm nhanh IgG/IgM bệnh giun chỉ là một xét nghiệm miễn dịch sắc ký dòng chảy bên.Băng thử nghiệm bao gồm: 1) một miếng liên hợp màu đỏ tía chứa các kháng nguyên phổ biến W. bancrofti và B. malayi tái tổ hợp được kết hợp với vàng dạng keo (liên hợp với giun chỉ) và liên hợp vàng IgG của thỏ, 2) một dải màng nitrocellulose chứa hai dải thử nghiệm ( dải T1 và T2) và dải điều khiển (C  ban nhạc).Dải T1 được phủ sẵn IgM đơn dòng kháng người để phát hiện  IgM anti-W. bancrofti và B. malayi, dải T2 được phủ sẵn thuốc thử để phát hiện IgG anti-W. bancrofti và B. malayi, và dải C được phủ trước IgG dê kháng thỏ.

Khi một lượng mẫu thử đủ lớn được phân phối vào giếng mẫu của băng cassette, mẫu thử sẽ di chuyển theo tác động mao dẫn qua băng cassette.Các kháng thể IgM của W. bancrofti hoặc B. malayi nếu có trong mẫu bệnh phẩm sẽ liên kết với các thể tiếp hợp của giun chỉ.Phức hợp miễn dịch là  sau đó được giữ lại trên màng bởi kháng thể IgM kháng người được phủ sẵn, tạo thành dải T2 màu đỏ tía, cho biết kết quả xét nghiệm IgM dương tính với W. bancrofti hoặc B. malayi.

Các kháng thể IgG của W. bancrofti hoặc B. malayi nếu có trong mẫu bệnh phẩm sẽ liên kết với các thể tiếp hợp của giun chỉ.Sau đó, phức hợp miễn dịch được thuốc thử phủ sẵn trên màng bắt giữ, tạo thành dải T1 màu đỏ tía, cho biết kết quả xét nghiệm IgG dương tính với W. bancrofti hoặc B. malayi.Vắng mặt  của bất kỳ dải thử nghiệm nào (T1 và T2) cho thấy kết quả âm tính.Xét nghiệm có chứa một chất kiểm soát nội bộ (dải C) sẽ thể hiện một dải màu đỏ tía của phức hợp miễn dịch IgG dê kháng thỏ/liên hợp IgG-vàng thỏ bất kể sự phát triển màu sắc trên bất kỳ dải thử nghiệm nào.Nếu không, kết quả xét nghiệm không hợp lệ và mẫu xét nghiệm phải được xét nghiệm lại bằng thiết bị khác.

Mỗi thiết bị chứa một dải có liên hợp màu

Các thiết bị kiểm tra được đóng gói riêng lẻ và thuốc thử phản ứng được rải sẵn ở

vùng tương ứng

pipet dùng một lần  Để thêm mẫu sử dụng

Đệm   Dung dịch muối đệm photphat và chất bảo quản

chèn gói  Đối với hướng dẫn hoạt động

LƯU TRỮ VÀ ỔN ĐỊNH

Bảo quản dưới dạng đóng gói trong túi kín ở nhiệt độ phòng hoặc trong tủ lạnh (2‐30°C).Thiết bị thử nghiệm ổn định cho đến ngày hết hạn được in trên túi niêm phong.Thiết bị kiểm tra phải ở trong túi kín cho đến khi sử dụng.Đừng đóng băng.Không sử dụng quá ngày hết hạn.

Chỉ dành cho sử dụng chẩn đoán trong ống nghiệm chuyên nghiệp.

 Không sử dụng sau ngày hết hạn ghi trên bao bì.Không sử dụng bài kiểm tra nếu túi giấy bạc của nó là

Bị hư hại.Không sử dụng lại các bài kiểm tra.

  Bộ sản phẩm này chứa các sản phẩm có nguồn gốc từ động vật.Kiến thức được chứng nhận về nguồn gốc và/hoặc vệ sinh

trạng thái của động vật không hoàn toàn đảm bảo không có tác nhân gây bệnh truyền nhiễm.Nó  do đó, chúng tôi khuyến nghị rằng các sản phẩm này nên được coi là có khả năng lây nhiễm và được xử lý tuân theo các biện pháp phòng ngừa an toàn thông thường (không ăn hoặc hít phải).

  Tránh lây nhiễm chéo các mẫu bằng cách sử dụng hộp đựng mẫu mới cho mỗi mẫu.

mẫu vật thu được.

Đọc kỹ toàn bộ quy trình trước khi thực hiện bất kỳ kiểm tra nào.

 Không ăn, uống, hút thuốc trong khu vực xử lý mẫu bệnh phẩm và bộ xét nghiệm.Xử lý tất cả

mẫu vật  như thể chúng chứa các tác nhân truyền nhiễm.Tuân thủ các biện pháp phòng ngừa đã được thiết lập chống lại các mối nguy vi sinh vật trong suốt quy trình và tuân theo các quy trình tiêu chuẩn để xử lý mẫu bệnh phẩm đúng cách.Mặc quần áo bảo hộ như áo khoác phòng thí nghiệm, găng tay dùng một lần và bảo vệ mắt khi xét nghiệm mẫu vật.

Không trao đổi hoặc trộn thuốc thử từ các lô khác nhau.

Độ ẩm và nhiệt độ có thể ảnh hưởng xấu đến kết quả.

LẤY MẪU VÀ XỬ LÝ MẪU

1. Xét nghiệm nhanh IgG/IgM của bệnh giun chỉ có thể được thực hiện trên Máu toàn phần / Huyết thanh / Huyết tương.

2. Thu thập toàn bộ  mẫu máu, huyết thanh hoặc huyết tương theo quy trình xét nghiệm lâm sàng thông thường.

3. Việc xét nghiệm phải được thực hiện ngay sau khi lấy bệnh phẩm.Không để mẫu ở nhiệt độ phòng trong thời gian dài.Để lưu trữ lâu dài, mẫu vật nên được giữ ở nhiệt độ dưới -20C.Máu toàn phần nên được bảo quản ở 2‐8C nếu xét nghiệm được thực hiện trong vòng 2 ngày kể từ ngày lấy.Không làm đông lạnh mẫu máu toàn phần.

4. Đưa mẫu vật về nhiệt độ phòng trước khi xét nghiệm.Các mẫu đông lạnh phải được rã đông hoàn toàn và trộn đều trước khi xét nghiệm.Mẫu vật không được đông lạnh và rã đông nhiều lần.

QUY TRÌNH KHẢO NGHIỆM

1. Đưa mẫu thử và các thành phần thử nghiệm về nhiệt độ phòng.Đặt thiết bị kiểm tra trên một bề mặt phẳng, sạch sẽ.

2. Đổ đầy mẫu thử vào ống nhỏ giọt pipet.Nhỏ 1 giọt mẫu (máu toàn phần, huyết tương hoặc huyết thanh) vào giếng mẫu, sau đó thêm ngay 1 giọt (khoảng 35‐50 µL) Chất pha loãng mẫu.Thiết lập hẹn giờ.

3. Có thể đọc kết quả sau 15 phút.Không đọc kết quả sau 15 phút.

GIẢI THÍCH KẾT QUẢ XÉT NGHIỆM

KẾT QUẢ TÍCH CỰC:

C

T1

T2

C

T1

T2

T1

T2

*LƯU Ý: Cường độ màu trong (các) vùng vạch thử nghiệm sẽ khác nhau tùy thuộc vào nồng độ kháng thể Filariasis trong mẫu vật.Do đó, bất kỳ sắc thái màu nào trong (các) vùng vạch thử nghiệm phải được coi là dương tính.

KẾT QUẢ ÂM TÍNH:

C

T1

T2

Sử dụng các băng xét nghiệm nhanh IgG/IgM bệnh giun chỉ riêng lẻ như được mô tả trong Quy trình xét nghiệm ở trên, chạy 1 Kiểm soát dương tính  và 1 Kiểm soát Âm tính (được cung cấp theo yêu cầu) trong các trường hợp sau để theo dõi hiệu suất xét nghiệm:

1. Người vận hành mới sử dụng bộ dụng cụ này trước khi thực hiện xét nghiệm mẫu vật.

2.  Một bộ thử nghiệm mới được sử dụng.

3.  Một lô hàng mới của bộ dụng cụ được sử dụng.

4.  Nhiệt độ được sử dụng trong quá trình bảo quản bộ dụng cụ nằm ngoài 2°C‐30°C.

5. Nhiệt độ của khu vực thử nghiệm nằm ngoài 15°C‐30°C.

1. Hiệu suất lâm sàng đối với xét nghiệm IgM

24 mẫu bệnh phẩm từ các bệnh nhân mắc bệnh giun chỉ bạch huyết cấp tính và 200 mẫu được thu thập từ khu vực không có bệnh giun chỉ đã được xét nghiệm bằng Xét nghiệm nhanh IgG/IgM của bệnh giun chỉ.

So sánh cho tất cả các đối tượng được hiển thị trong bảng sau:

Độ nhạy tương đối: 95,8%;Độ đặc hiệu tương đối: 100%;Đồng ý tổng thể: 99,6%

2. Hiệu suất lâm sàng đối với xét nghiệm IgG

26 mẫu bệnh phẩm từ bệnh nhân mắc bệnh giun chỉ bạch huyết mãn tính và 200 mẫu thu thập từ khu vực không có bệnh giun chỉ đã được xét nghiệm bằng Xét nghiệm nhanh IgG/IgM của bệnh giun chỉ.So sánh cho tất cả các đối tượng được hiển thị trong bảng sau:

Độ nhạy tương đối: 92,3%;Độ đặc hiệu tương đối: 100%;Đồng ý chung: 99. 1%

1. Phải tuân thủ chặt chẽ Quy trình Xét nghiệm và Diễn giải Kết quả Xét nghiệm khi xét nghiệm sự hiện diện của kháng thể đối với ký sinh trùng giun chỉ trong huyết thanh, huyết tương hoặc máu toàn phần của từng đối tượng.Việc không tuân thủ quy trình có thể cho kết quả không chính xác.

2.  Xét nghiệm nhanh IgG/IgM bệnh giun chỉ được giới hạn trong việc phát hiện định tính các kháng thể đối với W. bancrofti và B. malayi trong huyết thanh, huyết tương hoặc máu toàn phần của người.Cường độ của dải thử nghiệm không có mối tương quan tuyến tính với hiệu giá kháng thể trong bệnh phẩm.

3. Kết quả âm tính đối với một đối tượng riêng lẻ cho thấy không có kháng thể W. bancrofti và B. malayi có thể phát hiện được.Tuy nhiên, kết quả xét nghiệm âm tính không loại trừ khả năng tiếp xúc với W. bancrofti và B. malayi.

4. Kết quả âm tính có thể xảy ra nếu số lượng kháng thể W. bancrofti và B. malayi có trong mẫu xét nghiệm thấp hơn giới hạn phát hiện của xét nghiệm hoặc kháng thể được phát hiện không có trong giai đoạn bệnh mà mẫu Được thu thập.

5. Một số mẫu bệnh phẩm có chứa hiệu giá kháng thể heterophile hoặc yếu tố thấp khớp cao bất thường có thể ảnh hưởng đến kết quả mong đợi.

6. Các kết quả thu được từ xét nghiệm này chỉ nên được diễn giải khi kết hợp với các quy trình chẩn đoán và kết quả lâm sàng khác.

1. Bệnh giun chỉ bạch huyết: bệnh và cách kiểm soát.Báo cáo lần thứ năm của Ủy ban chuyên gia WHO về bệnh giun chỉ.Đại diện Công nghệ WHO 1992;281‐871.

2. Michael E, Bundy DAP, Grenfell BT.Đánh giá lại tỷ lệ lưu hành và phân bố toàn cầu của bệnh giun chỉ bạch huyết.Ký sinh trùng 1996;112:405‐428.

3. Eberhard ML, Lammie PJ.Chẩn đoán phòng thí nghiệm bệnh giun chỉ.lâm sàng.Phòng thí nghiệm Med 1991;11:977‐ 1010.

4. Thêm SJ, Copeman DB.ELISA dựa trên kháng thể đơn dòng có độ đặc hiệu cao và nhạy cảm để phát hiện kháng nguyên lưu hành trong bệnh giun chỉ bancroftian.Ký sinh trùng Trop Med 1990;41:403‐406

5. Lammie  PJ, Weil G, et al: Xét nghiệm kháng thể dựa trên kháng nguyên tái tổ hợp để giám sát chẩn đoán bệnh giun chỉ bạch huyết – một thử nghiệm đa trung tâm.Flaria Jornal 2004: 3: 9‐ 18.